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　　目前新冠病毒診斷主要采用的是qPCR核酸檢測，但是該方法顯示出較高的假陰性率和低敏感性，陽性檢出率僅為30%至50%，從而導(dǎo)致臨床高度疑似新冠感染患者或低病毒潛伏的“假痊愈患者”檢測“假陰性”現(xiàn)象頻發(fā)。此外，qPCR核酸檢測無法同時檢測其他秋冬季高發(fā)、癥狀與新冠病毒相似的其他呼吸道病毒，給疫情防控和患者分流管理帶來極大挑戰(zhàn)。

　　近期，武漢大學(xué)藥學(xué)院劉天罡教授，武漢大學(xué)人民醫(yī)院李艷教授、余鋰鐳教授，武漢臻熙醫(yī)學(xué)檢驗實驗室有限公司總負責(zé)人付愛思博士等迅速組建聯(lián)合團隊，創(chuàng)新性開發(fā)了納米孔靶向測序(Nanopore Targeted Sequencing， NTS)檢測方法。NTS結(jié)合了病毒靶向擴增和納米孔測序長讀長、實時數(shù)據(jù)輸出的優(yōu)勢，首次實現(xiàn)測序后4小時內(nèi)高敏感性、高準(zhǔn)確性同時檢測新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)和其他10大類、40種呼吸道病毒，其最低檢測限高于目前廣泛使用的qPCR的100倍。同時，該方法還可實現(xiàn)對新型冠狀病毒基因組變異情況進行檢測，監(jiān)控病毒變異引起的毒性與傳播能力改變的情況。

　　傳統(tǒng)qPCR方法僅針對病毒基因組上2-3個位點進行檢測分析，覆蓋的病毒基因組<0.5%，樣本在采樣、存儲、檢測過程發(fā)生中稍有偏差，會導(dǎo)致僅針對少數(shù)基因位點的PCR檢測手段的效率降低，甚至漏檢，造成“假陰性”，且檢測區(qū)域一旦發(fā)生變異，會造成檢測結(jié)果失效。而NTS技術(shù)不局限于中國或美國疾病控制中心(CDC)目前在qPCR方法中推薦的位點，而是將檢測范圍擴大到9個基因、12個位點，近10 kb區(qū)域，全面覆蓋病毒基因組上主要基因區(qū)域，100%覆蓋病毒基因組上毒力相關(guān)的重要基因，檢測病毒基因組范圍提升100倍，從而顯著提高檢測敏感性和準(zhǔn)確性。

　　通過平行測試NTS和qPCR兩種方法，臨床結(jié)果表明：45個臨床高度疑似新冠感染患者的樣品，NTS共鑒定出34個陽性樣品，比qPCR多出15個;16個臨床已確診新冠感染患者中，NTS全部檢測陽性，qPCR僅9個陽性。臨床確診樣本顯示，NTS比qPCR的陽性檢出率提升43.8%。此外，對于高濃度病毒樣本，NTS僅需測序10分鐘即可檢測陽性，即使極低濃度病毒樣本，也僅需測序4小時完成檢測，從收到樣本到出具結(jié)果，全程控制在6-10小時而且該技術(shù)所需的納米孔測序平臺對實驗室要求不高，其中最小測序儀MinION是便攜式的，因此NTS也適合不同級別的醫(yī)院使用。

NTS檢測 圖自科技日報

　　劉天罡說，qPCR方法好比是用一把狙擊槍去擊打樣本中的病毒核酸，有一定概率擊不中，而NTS技術(shù)不是用狙擊槍，而是撒網(wǎng)，同時撒十幾張網(wǎng)，這樣能捕獲病毒核酸的概率大大增加，不僅如此，還能在捕獲的同時讀出序列。這樣，一次檢測不僅可以確診是否新冠，而且其他常見的呼吸道病毒，包括博卡病毒、鼻病毒、人間質(zhì)肺病毒、呼吸道合胞病毒、冠狀病毒、腺病毒、副流感病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和丙型流感病毒等，也能同時檢測出來，能為醫(yī)生分診提供確切依據(jù)。更重要的是，還能檢測在病毒傳播期間與毒力相關(guān)的基因是否發(fā)生了突變，從而迅速為后續(xù)的流行病學(xué)分析提供信息。