022222 結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂(VRBGA)

　　(Violet Red Bile Glucose Agar)

　　用 途：

　　結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂用于阪崎腸桿菌的選擇性分離培養以及腸道菌的計數和鑒別(SN/T 1632.1-2005)。

　　原 理：

　　蛋白胨和酵母抽取物提供碳氮源和微量元素;乳糖和葡萄糖是可發酵的糖類;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;3號膽鹽和結晶紫抑制革蘭氏陽性菌，特別抑制革蘭氏陽性桿菌和糞鏈球菌;中性紅為pH指示劑。

　　培養基配方(每升)：

　　酵母抽取物 　3g

　　蛋白胨 　7g

　　氯化鈉 　5g

　　3號膽鹽 1.5g

　　乳糖 　 10g

　　葡萄糖　　10g

　　中性紅 　0.03g

　　結晶紫 　0.002g

　　瓊脂 　15g

　　最終pH 7.4±0.2

　　使用方法：

　　1、稱取結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂51.5g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，備用(不得超過3h)。

　　2、取奶粉樣品333克按MPN三管法分別取100克、10克和1克分裝在各三個2000ml、250ml和100ml的三角瓶中，在三角瓶中已裝有經45℃預熱的9/10(樣品為1/10)的無菌蒸餾水，搖勻，在36±1℃培養18-22小時(SN和FDA方法)。

　　3、各取10ml上述懸浮液加到裝有90mlEE肉湯(022160)的150ml的三角瓶中，在36±1℃增菌培養18-22小時。

　　4、用劃線或涂布法把混勻的EE肉湯接種到VRBGA瓊脂平板上，36±1℃培養18-22小時。

　　5、從VRBGA平板上挑取5個可疑菌落分別接種到5個TSA平板，25±1℃培養48-72小時。

　　6、可使用MicrogenTMGN-ID或API20E或生化管試驗，對疑似阪崎腸桿菌菌落進行生化鑒定。

　　7、奶粉以外的其它樣品，以無菌手續取樣品25g或25mL，加入含225mL無菌磷酸鹽緩沖液(或生理鹽水)的三角瓶內，充分振搖或用均質器均質1min成1：10稀釋液，然后以1：10繼續稀釋，選擇三個適宜的連續稀釋度，每個稀釋度接種兩個平皿，傾注加熱溶解并冷至45℃左右的培養基。

　　8、觀察結果。

　　質量控制：

　　本品傾注平皿后呈暗紫紅色，下列菌株接種后于36±1℃培養18—24h生長情況如下表。

　　貯 存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。

　　規 格：250g

　　參考文獻:

　　1.SN/T 1632.1-2005 中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準 奶粉中阪崎腸桿菌檢驗方法 第一部分:分離與計數標準